Regno | Batteri |
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Ramo | Proteobatteri |
Classe | Gamma proteobatteri |
Ordine | Legionellales |
Famiglia | Legionellaceae |
I batteri del genere Legionella , la Legionella , sono bacilli Gram negativi .
Si tratta di batteri naturalmente presenti nell'acqua e nei fanghi , responsabili di una malattia respiratoria , la legionellosi . Colonizzano frequentemente le reti idriche, in particolare le reti di acqua calda sanitaria , gli impianti di condizionamento e le torri di raffreddamento ad aria (TAR).
La Legionella si sviluppa e prolifera:
Le legionelle si moltiplicano debolmente sotto i 20 ° C , smettono di riprodursi a 55 ° C e vengono distrutte da 60 ° C (secondo un tempo di contatto molto preciso) per distruzione istantanea da 70 - 74 ° C .
La presenza di Legionella nell'acqua non è una condizione sufficiente per provocare la malattia. Devono essere presenti tre fattori:
Nessun caso di legionellosi è stato diagnosticato a seguito di ingestione di acqua contaminata, né si è verificato alcun caso di trasmissione da uomo a uomo. La quantità di inoculo batterico non sembra influenzare lo sviluppo della legionellosi. Infine, sono stati incriminati i fattori climatici (forti piogge e umidità, recrudescenza dei casi in estate).
Inoltre, i fattori di suscettibilità correlati all'ospite umano sono necessari per lo sviluppo della malattia, sebbene al momento non siano completamente compresi. Tuttavia, i fattori di rischio possono essere individuati: età avanzata, deficit immunitario (cancro / malattie del sangue, diabete) ma soprattutto fumo. L'infezione è eccezionalmente descritta nei bambini.
Il limite di soglia da non superare è di 1.000 CFU / litro di Legionella pneumophila per l'acqua calda sanitaria (ACS) e per le torri di raffreddamento ad aria (TAR), nuova norma AFNOR NF T90-431 di novembre 2014, rivista ad agosto 2017 . Per ART sono impostate 3 soglie: <1000 CFU / l ; tra 1.000 e 100.000 CFU / le > 100.000 CFU / l . Le ultime 2 soglie richiedono azioni curative da parte dell'operatore. Infine, i risultati possono essere resi sotto forma di Flora interferente.
Si stima, in Europa, che il 90% della legionellosi sia legato alla specie L. pneumophila e che in media l'85% sia dovuto esclusivamente al sierogruppo 1. I sierogruppi da 2 a 15 condividono il restante 10%. Al contrario, in Australia, è la specie longbeachae la responsabile della maggior parte dei casi di legionellosi. Infine, esistono altre 51 specie del genere Legionella, comunemente chiamato Legionella spp e il cui rischio infettivo è discusso da igienisti e specialisti in malattie infettive. Tuttavia, la presenza di Legionella spp dimostra che le condizioni di rete sono ottimali per la moltiplicazione della legionella e quindi potenzialmente della Legionella pneumophila .
Ci sono circa 6.000 casi all'anno in Europa e tra i 1.200 casi e 1.600 casi all'anno in Francia con un tasso di mortalità che varia tra il 10 e il 15% nonostante il trattamento antibiotico appropriato (143 morti per 1.262 casi segnalati nel 2013 e la cui evoluzione è noto solo per 1.168 casi , cioè una letalità del 12,2%) (fluorochinoloni o macrolidi).
La Legionella è di origine idro-tellurica. Il loro habitat naturale è rappresentato da ambienti acquatici naturali o artificiali. Risiede lì, tra l'altro, nei biofilm (residui organici e microorganici formati nelle tubazioni e sulla superficie dell'acqua stagnante) che lo proteggono dalla clorazione e sembrano svolgere un ruolo importante per la sua sopravvivenza negli impianti. Si trova anche nei biofilm dei sistemi idrici domestici, a volte associati a Pseudomonas aeruginosa . Oltre alla natura dell'acqua (acidità, mineralizzazione, materia organica e contenuto di nutrienti), anche la temperatura e il tipo di materiali utilizzati negli impianti idraulici giocano un ruolo importante nella formazione dei biofilm.
Il biofilm si sviluppa in particolare in:
Inoltre, i protozoi d'acqua dolce (compresa l' ameba ) rappresentano l'ospite naturale della Legionella all'interno del quale svolge una fase del suo ciclo vitale. Il batterio e il suo ospite hanno conosciuto un'evoluzione convergente permettendo ai batteri acquisiti nel suo patrimonio genetico di geni codificanti la maggior parte dei fattori di virulenza della legionella. Il comportamento e la virulenza della Legionella nel loro ambiente microbico è ancora poco compreso (ad esempio quello della loro capacità di invadere alcuni protozoi), e dell'ameba così come del loro ambiente stesso: ecosistema di biofilm in particolare, interazioni con altre specie, turbolenza dell'acqua. nelle reti, ecc. L' ANSES ha affermato nel 2011 che "il monitoraggio dei protozoi (amebe e ciliati) nelle strutture e il loro contributo alla pericolosità delle strutture a rischio è troppo ampiamente trascurato" .
La legionellosi può manifestarsi in due distinte forme cliniche:
L' infezione nosocomiale è implicata nell'1-10 % dei casi di polmonite nosocomiale.
La Legionella pneumophila è in grado di infettare l'ameba acquatica così come i macrofagi alveolari e gli pneumociti umani a seguito di un ciclo infettivo simile.
A contatto con la sua cellula ospite (ameba o macrofagi), L. pneumophila utilizza il suo principale fattore di virulenza: il suo sistema di secrezione Dot / Icm di tipo IV. Questo sistema consentirà ai batteri di iniettare direttamente nel citoplasma del suo ospite più di 300 proteine batteriche chiamate effettori. Queste proteine permetteranno al batterio di deviare a proprio vantaggio vari meccanismi cellulari del suo ospite.
Alcuni di questi effettori sono coinvolti nei meccanismi di ingresso nella cellula ospite attraverso il dirottamento dei processi di macropinocitosi o fagocitosi. Queste proteine batteriche sono anche necessarie affinché i batteri sfuggano alla degradazione per via endosomica dell'ospite, in particolare l'effettore SidK. Partecipano inoltre alla creazione di un vacuolo di replicazione per il batterio, denominato LCV per vacuolo contenente Legionella, caratterizzato in particolare dal reclutamento di vescicole provenienti dal reticolo endoplasmatico. Molti effettori del sistema Dot / Icm sono coinvolti in questo processo: SidM / DrrA, SidC, RalF, LepB, ecc. Così mimetizzata nel LCV, la legionella potrà moltiplicarsi in modo esponenziale fino ad esaurire tutte le risorse nutritive disponibili. Questa carenza innesca quindi la riprogrammazione dell'espressione genetica del batterio che poi esprime i suoi fattori di virulenza (effettori del sistema di secrezione di tipo IV in particolare) e fattori di mobilità (flagello). I batteri vengono quindi rilasciati nel citoplasma dell'ospite e quindi nell'ambiente in cui dovranno sopravvivere, a volte sotto forma di biofilm, fino a quando una nuova cellula ospite non viene infettata.
Per reti ACS:
Esistono diversi metodi che il Ministero della Salute ha testato e convalidato per le reti di acqua potabile. Questi metodi compaiono nella circolare 2002/243 delAprile 2002. Troviamo in particolare:
Lo shock con perossido di idrogeno e argento (H 2 O 2+ Ag) che consiste nel far circolare la soluzione in tutta la rete e nei punti contaminati (quando non in uso) ad una concentrazione che va da 100 a 1000 mg / L di acqua ossigenata + ag per un tempo di contatto fino alle ore 12 . Al termine del tempo di contatto viene effettuato uno svuotamento completo della rete. Uno dei vantaggi di questo metodo è distruggere il biofilm.
Lo shock di cloro consiste nell'ottenere una concentrazione di cloro libero di 15 mg / l per 24 ore o da 30 a 50 mg / l per 2-3 ore a livello dei serbatoi. Si effettua uno svuotamento completo della rete dopo aver fatto passare l'acqua clorata al massimo o addirittura a tutti i punti di utilizzo.
Lo shock termico viene effettuato aumentando la temperatura dell'acqua di 70 ° C per 30 minuti e l'acqua deve fluire a tutti i punti di utilizzo per 5 a 10 minuti o più a 65 ° C .
Rischi associati agli shock:
Per i TAR (torre di raffreddamento o torre di raffreddamento ad aria) , la legge sulla sanità pubblica del 2004 mirava a ridurre del 50% il numero di casi di legionella per il periodo 2004-2008. I decreti del 2004 si sono evoluti attraverso quelli del14 dicembre 2013.
Per le reti ACS (acqua calda sanitaria) è necessario basarsi sugli ordini del1 ° febbraio 2010(lotta e prevenzione delle contaminazioni delle reti di acqua calda sanitaria da legionella. Sembrerebbe logico seguire le amebe (che sono un indicatore a priori e un fattore di rischio), ma può esserci legionella senza amebe, e il metodo comune di rilevamento delle amebe è costoso, richiede tempo e non tutti i laboratori sono attrezzati per offrirlo, quindi non viene utilizzato di routine, ma è utile in caso di sovra-contaminazione post-trattamento.
Il monitoraggio sta quindi procedendo in Francia, dove è diventato obbligatorio per l'acqua minerale per uso terapeutico (negli stabilimenti termali), nelle torri di raffreddamento ad aria, in qualsiasi rete di acqua calda sanitaria di un istituto sanitario o di strutture sociali e mediche. residenze turistiche, campeggi, istituti penitenziari e infine tutti gli edifici pubblici con docce collettive di produzione ACS.
A1 ° gennaio 2012, tale obbligo è esteso ad altri stabilimenti aperti al pubblico (ERP).
Il DGS e il DGPR hanno riconosciuto nel 2009 che il metodo di coltura (obbligatorio in Francia) impone un ritardo dopo la coltivazione (sono necessari almeno 8 giorni di coltura, sebbene siano possibili e obbligatori risultati intermedi da fornire in caso di superamento tra 3 e 5 giorni), a discapito della migliore gestione degli impianti e dell'ottimizzazione dei tempi per la revoca delle misure restrittive sull'uso dell'acqua. Inoltre non tiene conto di tutte le forme di Legionella, perché nell'acqua sono presenti una serie di Legionella e altri batteri vitali, ma che non sappiamo come coltivare.
Un parere e un rapporto (2011) della perizia collettiva di ANSES hanno valutato i metodi per rilevare e contare la legionella nell'acqua , concludendo che solo due metodi sono "sufficientemente rilevanti e robusti" ; il metodo di coltura regolatoria (standard NF T90 431) e (più veloce ma non regolamentare nei decreti ECS e TAR) PCR quantitativa (standard NF T90 471).
Attualmente non esiste un sistema portatile in grado di effettuare il conteggio della Legionella.
È obbligatorio sulle reti ACS e TAR tramite i Carnet Sanitari ECS o TAR:
Il monitoraggio batteriologico è obbligatorio (in ambiente ospedaliero spesso effettuato da un tecnico bioigienista ):
Oltre ai campioni microbiologici:
Negli stabilimenti sanitari, le procedure riguardanti la rete idrica devono essere validate dal CLIN dello stabilimento. In caso di allerta, la direzione e il CLIN devono essere avvisati.
In caso di intervento tecnico sulla rete idrica, il personale deve essere protetto da qualsiasi aerosolizzazione dell'acqua, in particolare durante gli interventi sulla rete dell'acqua calda. Indossare la maschera FFP3.
I guanti non sono necessari per la protezione contro la legionella. La legionellosi è un'infezione strettamente respiratoria, non ci sono infezioni cutanee da Legionella .
I batteri del genere Legionella sono bacilli Gram-negativi (ma raramente visibili all'esame diretto), sono mobili (1 o 2 flagelli polari), aerobi stretti , catalasi debolmente positivi. La loro parete ha la particolarità di contenere acidi grassi insaturi ramificati. Questi batteri sono particolarmente esigenti e possono essere coltivati solo su terreni speciali contenenti cisteina e ferro come il terreno CYE ( carbone , estratto di lievito ), il terreno GVPC o il terreno BCYE ( estratto di lievito con carbone vegetale tamponato con cisteina, ferro e carbone). medio di colore nero per evitare che i radicali liberi di uccidere legionella in vitro .
È un terreno di coltura utilizzato per l'isolamento selettivo della Legionella; è anche chiamato Agar Legionella