Test dei micronuclei

Il test dei micronuclei (o test della conta dei micronuclei ) è un test ecotossicologico o di biomonitoraggio ampiamente utilizzato, basato sulla rilevazione e il conteggio dei micronuclei in cellule esposte (solitamente in vitro ) ad un agente genotossico o sospettate di essere tali. Come promemoria, un micronucleo si trova in una cellula vivente , un "falso nucleo", che si forma in modo anomalo durante la divisione cellulare . Se non ha causato la morte cellulare (per apoptosi ), persisterà per tutta la vita della cellula e di solito è associato ad un effetto mutagenoe talvolta cancerogeno . La presenza di micronuclei indica che la cellula è stata esposta ad uno o più agenti genotossici e clastogeni ( cioè responsabili delle rotture nel doppio filamento della molecola di DNA ) o ad un agente "aneugenico" (cioè alterando l' apparato mitotico che consente la divisione cellulare).

Il test del micronucleo è una delle varianti del test di anomalia cromosomica . In particolare, consente di valutare l'esposizione recente (ore, giorni).

Applicazioni

Ha lo scopo di valutare il potenziale genotossico di un composto o di mostrare l'esposizione a un agente mutageno. E ha molti usi specifici:

salute-ambiente , biomonitoraggio ( ad esempio in ecotossicologia , è utilizzato per monitorare l'inquinamento dell'aria, della superficie o dell'acqua potabile, del suolo o l'esposizione di piante, animali, funghi o microrganismi a inquinanti mutageni, ad esempio da emissioni industriali, siti di rifiuti pericolosi, disinfettanti dell'acqua, ecc. );
salute sul lavoro , per monitorare il personale potenzialmente esposto a mutageni. Ha un valore predittivo per il rischio di cancro, ad esempio con formaldeide o lavorando in un laboratorio di patologia . ;
Valutazione di sostanze chimiche genotossiche ( in vivo e in vitro ) ad esempio prima dell'autorizzazione a commercializzare una molecola (farmaco, pesticida, ecc.);
Ricerca o valutazione di prodotti antigenotossici
Studio del danno al DNA (rottura del filamento singolo; siti alcali-labili; reticolazione del DNA); studio sulla riparazione del DNA o sull'apoptosi.

Può essere utilizzato su tutti i tipi di cellule bersaglio (cellule della vescica, cellule intraorali, fibroblasti , cheratinociti , ecc. ) Anche sulle cellule vegetali.

Viene utilizzato in particolare sui linfociti T in coltura (cellule modello); possiamo quindi contare il numero di micronuclei visibili nei linfociti T binucleati ottenuti bloccando la divisione citoplasmatica dalla citocalasina B dopo la completa divisione nucleare, con il vantaggio di contare solo le lesioni genotossiche ereditabili (micronuclei nei soli linfociti binucleati), solo lesioni rigorosamente soddisfare la definizione di mutazione genetica .

Può anche essere applicato a un campione di cellule esposte in vivo (ad esempio linfociti di animali da esperimento o esseri umani potenzialmente esposti a un prodotto genotossico ).

Utile aggiunta

Il test può essere utilmente integrato dallo studio del tipo e della qualità del "materiale genetico" racchiuso nel micronucleo (ci sono centromeri ?, Che tipo di cromosoma sono alterati lì?, Con quale tipo di cromosoma? Alterazione?).

Ciò è attivato da un fluorescente in situ ibridazione tecnica (tecnica FISH). Possiamo così comprendere meglio i meccanismi in atto: ad esempio la presenza di centromeri nei micronuclei dovrebbe suggerire un effetto aneugenico mentre la loro assenza punta maggiormente verso un effetto clastogenico ).

Vantaggi / svantaggi, limitazioni

Benefici

Il test è di facile esecuzione, rileva sia effetti clastogenici che aneugenici ed è di rapida interpretazione; e un'analisi cella per cella consente di ottenere un gran numero di dati utili per una buona elaborazione statistica dei risultati.

Svantaggi, limitazioni

Questo test non rileva tutte le aberrazioni cromosomiche.

Richiede campionamento cellulare (⇒ invasività, fattore di stress).

Ci sono fattori di confusione (come in tutti i test di questo tipo). Quelli che devono essere considerati includono età, tabacco e polimorfismo di espressione enzimatica.

All'inizio degli anni 2000, il meccanismo che spiegava perché questi fattori creavano confusione (per il tabacco in particolare) era tuttavia ancora poco conosciuto e controverso.

Come tutti i test di questo tipo, non consente di specificare in una miscela quale sia l'agente mutageno; così dopo aver visto la comparsa di tumori del sistema linfoide in due dipendenti che per anni hanno maneggiato oli dal fegato di squali del Mediterraneo (e squalene estratto da questi oli), poi dopo aver notato che l'applicazione di squalene sulla pelle di topi da laboratorio ha indotto anche questo tipo di tumore o leucemia , abbiamo applicato il test del micronucleo a oli grezzi estratti dal fegato di tre specie di squali del Mediterraneo (di cui uno che vive in superficie, Prionace glauca e due che vivono in grandi fondi, Centrophorus granulosus e Galeus melastomus . I risultati hanno confermato che "Gli oli di fegato grezzi di tre specie di squali sono genotossici e confermano che il rischio di cancerogenicità è elevato . " Il test da solo non chiarisce se l'agente mutageno è solo squalene (ampiamente utilizzato dalle industrie farmaceutiche e cosmetiche , perché è particolarmente stabile a temperature molto elevate) o se altro Sono coinvolti anche gli ts liposolubili (molti inquinanti marini ).

Norme ...

Il test del micronucleo è oggetto di una linea guida dell'OCSE per la sperimentazione di sostanze chimiche, tuttavia, applicabile solo agli eritrociti dei mammiferi (riga 474).

Note e riferimenti

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Vedi anche

Bibliografia

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