Nella coltura cellulare, il passaggio è il processo di subcoltura delle cellule animali. Di solito è fatto per produrre un gran numero di cellule da cellule preesistenti.
In laboratorio, le cellule di mammifero aderenti vengono coltivate in fiasche o piastre di Petri di vari diametri, con terreno FCS e DMEM e incubate a 37 ° C in un'atmosfera al 5% di anidride carbonica e in presenza di acqua per avere umidità costante. Le cellule in coltura cresceranno quindi fino a rivestire completamente il fondo del pallone o della capsula di Petri . Normalmente, ad esempio per una coltura di cellule di tipo HeLa che copre il 10% della superficie della coltura, ci vorranno da due a tre giorni per raggiungere la confluenza del 100% .. Se non si considera nulla in questa fase, il cibo inizia a scarseggiare e le cellule iniziano a morire; più cellule che si sviluppano senza aderire moriranno più velocemente e non potranno essere trapiantate. È quindi necessario il passaggio, vale a dire che le cellule saranno sottocoltivate in un nuovo pallone con nuovo terreno di coltura.
Ecco come avviene la manipolazione. Il mezzo esaurito viene rimosso, di solito utilizzando una pipetta collegata a una pompa a vuoto. Le cellule vengono lavate con una soluzione salina tamponata con fosfato chiamata PBS (soluzione salina tamponata con fosfato), quindi viene aggiunta una soluzione di tripsina per staccare le cellule dal fondo del pallone (lasciare agire per due minuti a 37 ° C nell'incubatore ). Successivamente, si aggiunge terreno integrato con FCS (contenente inibitori della tripsina) e si effettuano aspirazioni posteriori con una pipetta al fine di individualizzare il più possibile le cellule. Il processo viene continuato prelevando un decimo del volume di sospensione cellulare contenuto nel pallone e vengono posti in un nuovo pallone sterile contenente nuovo mezzo DMEM. Terminiamo posizionando il pallone nell'incubatrice. E il ciclo ricomincia fino al passaggio successivo. Le cellule rimanenti vengono rimosse in una soluzione di candeggina per ucciderle.
Per ottenere i migliori risultati, il passaggio deve essere eseguito prima di raggiungere la confluenza del 100%.