Macchia May-Grünwald Giemsa

La colorazione di May-Grünwald Giemsa , a volte chiamata anche colorazione Pappenheim è un metodo di colorazione utilizzato soprattutto in ematologia per differenziare le cellule del sangue nelle preparazioni cellulari ( citologia ). Le macchie di May-Grünwald, Giemsa, Leishmann sono varietà del metodo di Romanowsky (medico russo, 1861-1921).

Principio di colorazione

Si basa sull'azione combinata di due coloranti neutri:

• Il May-Grünwald contenente un colorante acido, l' eosina e un colorante basico, il blu di metilene .
• Il Giemsa , contenente anche l' eosina , e un colorante basico, il blu metilene

Questi due coloranti sono in soluzione in alcool metilico in forma inattiva. Dopo l'aggiunta di acqua, i sali precipitano (metilene eosinato e metilene azzurro) e si legano selettivamente ai costituenti cellulari.

• I costituenti cellulari acidi, fisseranno elettivamente i coloranti di base. Questi elementi sono chiamati basofili ( DNA , citoplasma dei linfociti ricchi di RNA).
• I costituenti cellulari di base legheranno elettivamente i coloranti acidi. Questi elementi sono qualificati come acidofili o eosinofili (caso dell'emoglobina, una proteina basica contenuta nei globuli rossi e granulati di granulociti eosinofili).
• I costituenti che legano i due tipi di coloranti sono chiamati neutrofili .

Risultato:

• I nuclei vanno dal blu al viola-nero
• I globuli rossi sono beige-rosa,
• le granulazioni dei granulociti eosinofili sono arancioni.
• Le granulazioni dei granulociti neutrofili sono viola-lilla.
• Le granulazioni dei granulociti basofili sono blu-nere
• Le granulazioni dei grandi linfociti sono viola.

Particolarità

Due tipi di comportamento del colorante coesistono in questa colorazione:

- Colorazione ortocromatica: il colorante mantiene il suo colore una volta fissato sulla componente cellulare (caso di metilene eosinato: colore arancione di eosina conservato, colore blu di blu di metilene conservato).

- Colorazione metacromatica: il colorante cambia colore una volta fissato sulla componente cellulare (caso di metilene azzurro che diventa viola quando fissato sui costituenti azurofili ).

Le diluizioni dei coloranti ed i risciacqui devono essere effettuati con tampone a pH 7 ( acqua neutra ) in modo da non disturbare le affinità tintorie dei costituenti cellulari.

Tecnico

La modalità di funzionamento di seguito è fornita a titolo indicativo. Deve essere adattato secondo le specifiche del produttore.

Fissazione

Le cellule del sangue presenti sullo striscio devono prima essere fissate. Per fare questo, posizionare lo striscio orizzontalmente in una scatola di colorazione e versare da 15 a 20 gocce di colorante May-Grünwald in modo da coprire completamente il vetrino. Attendi 2-3 minuti affinché il metanolo ripari le cellule.

Colorazione May-Grünwald

Aggiungere tanta acqua neutra quanta era la tinta, lasciare agire due minuti e sciacquare il vetrino con acqua neutra.

Colorazione Giemsa

Diluire Giemsa immediatamente prima dell'uso mettendo 20 ml di acqua neutra con 30 gocce di colorante in una provetta. Versare il contenuto in una scatola Laveran non appena il vetrino è pronto e mescolare agitando delicatamente (la forza della macchia è massima durante la miscelazione). Posizionare il vetrino, spalmare il lato verso il fondo della teglia Laveran. Lasciar agire 20 min. e risciacquare con acqua neutra.

Essiccazione

Lascia asciugare il vetrino all'aria. Attendere la completa asciugatura prima dell'osservazione al microscopio.

Osservazione

Granulociti eosinofili	Granulociti basofili	Monocita

Vedi anche

Altre tecniche di colorazione:

• Colorazione di Papanicolaou di Georgios Papanicolaou .